展会新闻

◆ 徕卡STED club高端显微成像技术交流会圆满落幕

徕卡STED club高端显微成像技术交流会。
 
 
 
开幕式上,徕卡显微系统中国区总经理陈淮先生对各位专家的莅临表示了欢迎,回顾了Leica在超高分辨成像领域多年的耕耘,并表示Leica会坚持和客户共同成长,为客户们提供更好的产品和服务。
 
 
 
会上诸多Leica的资深用户分享了自己的研究成果与心得体会,我们一起来回顾下吧。
 
讲题一:超分辨成像技术研究进展
讲者:深圳大学 屈军乐 教授
 
 
 
本次徕卡STED用户会学术交流环节的开场报告由深圳大学物理与光电工程学院的屈军乐教授带来,报告题目为“超分辨成像技术研究进展”。屈教授长期从事超分辨荧光显微技术及其生物医学应用研究并在该领域造诣颇深。本次报告中,屈教授不仅向我们介绍了他所带领的研究团队一路走来所发展的STED技术(包括自适应光学STED、相图分析STED、数字增强STED、时空调制STED、频率调制STED等)及其应用,还和我们分享了他们团队荧光染料开发的成果及宝贵经验。将STED的成像技术提升和新型荧光染料“双剑合璧”后,屈教授的团队实现了STED空间分辨率提升、长时间活细胞成像、低损耗光功率成像等多项技术突破。屈教授坦言,他在99年刚到深圳大学时就接触到徕卡SP2共聚焦,至今使用过多款徕卡显微成像设备,并对徕卡显微镜的成像质量和硬件品质给予了很高的评价。
 

讲题二:受激辐射显微镜在多种生物样品中的应用
讲者:上海科技大学 李晓明 主任
 
  
李晓明老师作为上海科技大学生命学院分子影像平台主任,自2016年平台成立以来,针对实验室不同研究需求采购了多个厂家的超高分辨率显微镜,其中就包括徕卡STED纳米显微成像设备。此次会议中李老师针对STED成像优势、成像过程中遇到的问题、解决方法及实际应用展开了详细介绍。
 
李老师首先就几台超高显微镜的特点,包括分辨率、灵敏度、特殊制样、所见即所得等多方面进行对比。STED纳米显微镜在分辨率方面可突破50nm,并做到所见即所得,但由于STED技术特点,获得高分辨率的同时会受到一些限制,比如需要特殊制样,样品不易太厚,成像深度不够,样品本身需要一定的荧光亮度和信噪比,并且由于较强的STED损耗光无法进行长时间活细胞成像等。随后李老师针对这些问题给出了一些解决或优化方法,在样品制备时,李老师推荐参考徕卡STED样品制备手册The_Guide_to_STED_Sample_Preparation_MC-0002370_25032021.pdf (leica-microsystems.com),其中会标注注意事项及推荐的染料信息,值得一看。总结几点:优先选择775脉冲激光器;选择受激辐射效果好、信号亮、荧光稳定的染料;选择合适封片剂和标准盖玻片可减少折射率的影响,提高成像深度。在拍摄多通道时,注意拍摄顺序,当不同通道出现位置色差时可用STED标尺校正。超高显微镜的共定位分析不再简单的看两个通道是否重合,而是通过测两个蛋白间的距离来判断相关性。并且结合荧光寿命的新一代TauSTED的出现使得对厚样品不同层、活细胞不同时间的连续成像成为了可能。

 
讲题三:FLIM-FRET及STED技术联合使用在呼吸道病毒科研中的应用

讲者:中国医学科学院医学生物学研究所 陈燕丽 助理研究员
 
陈老师在讲座中介绍到共聚焦显微镜在呼吸道病毒的研究中应用领域很多,包括病毒与宿主蛋白的相互作用,例如病毒感染细胞会发生线粒体应激,产生线粒体DNA释放,新冠病毒N蛋白与其他蛋白的离体和在体相互关系等。 
 
陈老师所在课题组制备了EVD68病毒的单克隆抗体A6-1,,为了研究抗体和病毒颗粒的相互作用,利用了FLIM-FRET技术,测定了两个毒株(KM毒株,Fermon毒株)的六个病毒片段和抗体的相互作用。发现VP1-1与A6-1的相互作用FRET效率最高,并且使用其他的研究手段确定了二者的结合位点。 
 
还研究了流感病毒的单克隆抗体CR9114,这个抗体和高危的流感毒株H1N1及H7N9的亲和力不高。通过改造抗体的轻链和重链,并且测定了和H1N1及H7N9的FRET效率,证实通过改造提高了CR9114和H1N1和H7N9的结合效率。还使用STED超高分辨显微镜观察了纳米颗粒疫苗的超微结构。
 
 
 
最后,陈老师总结道,FLIM-FRET可以用于呼吸道病毒颗粒和其抗体之间结合力的筛选,也可以用于改造后的抗体亲和力鉴定,在呼吸道病毒研究方面有广泛的应用前景。
 




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